實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細(xì)胞廣泛用于國(guó)內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
產(chǎn)品名稱 | 生長(zhǎng)特性 | 貨號(hào) |
肺癌細(xì)胞；907 | 貼壁生長(zhǎng) | EY-X63986 |
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細(xì)胞名稱 肺癌細(xì)胞；907
形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性: 該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件: McCoy's5AMedia(ModifiedwithTricine)10%FBS
傳代方法: 1:3~1：8傳代；每周2~8次。
傳代情況: C5
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 陰性
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子檢測(cè)試劑盒生長(zhǎng)特性: 半貼壁生長(zhǎng)培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSkeratinocyte autocrine factor;Amphiregulin
靜止素Q6硫基氧化酶1檢測(cè)試劑盒生長(zhǎng)特性: 半貼壁生長(zhǎng)培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSSulfhydryl oxidase 1
靜止素Q6硫基氧化酶2檢測(cè)試劑盒生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)新生牛血清，10%Sulfhydryl oxidase 2
巨噬細(xì)胞炎性蛋白3β檢測(cè)試劑盒生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)培養(yǎng)條件: DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)新生牛血清，10%Macrophage Inflammatory Protein 3β
巨噬細(xì)胞炎癥蛋白1β檢測(cè)試劑盒生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)新生牛血清，10%macrophage inflammatory protein 1β
抗IgE受體抗體檢測(cè)試劑盒生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)培養(yǎng)條件: F12K新生牛血清，10%IgE receptor-Ab
抗L型鈣通道蛋白抗體檢測(cè)試劑盒生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)新生牛血清，10%；水解乳蛋白，10%Anti-CAA1C;Anti-CACH2;CaV1.2
抗N-甲基-D-天冬氨受體抗體檢測(cè)試劑盒生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)培養(yǎng)條件: F12K新生牛血清，10%N-methyl- D-aspartate receptor antibody
抗甲狀腺微粒體抗體檢測(cè)試劑盒生長(zhǎng)特性: 懸浮生長(zhǎng)培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)新生牛血清，10%Anti-Thyroid Microsome Antibody
抗透明帶抗體檢測(cè)試劑盒生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)新生牛血清，10%anti-zona pellucida antibody
抗小核糖核蛋白;Sm抗體檢測(cè)試劑盒生長(zhǎng)特性: 半貼壁生長(zhǎng)培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)新生牛血清，10%small nuclear ribonucleoprotein
抗心磷脂IgA抗體檢測(cè)試劑盒生長(zhǎng)特性: 半貼壁生長(zhǎng)培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)新生牛血清，10%anti-cardiolipin antibody IgA
抗心磷脂IgM抗體檢測(cè)試劑盒生長(zhǎng)特性: 半貼壁生長(zhǎng)培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)新生牛血清，10%anti-cardiolipin antibody IgM
抗血小板IgG抗體檢測(cè)試劑盒生長(zhǎng)特性: 半貼壁生長(zhǎng)培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)新生牛血清，10%platelet antibodies IgG
抗中性粒細(xì)胞抗體檢測(cè)試劑盒生長(zhǎng)特性: 半貼壁生長(zhǎng)培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)新生牛血清，10%anti-neutrophil antibody
可溶性CD44V6檢測(cè)試劑盒生長(zhǎng)特性: 半貼壁生長(zhǎng)培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)新生牛血清，10%sCD44v6
可溶性CD86檢測(cè)試劑盒生長(zhǎng)特性: 半貼壁生長(zhǎng)培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)新生牛血清，10%sCD86
肺癌細(xì)胞；907異土木香內(nèi)酯470-17-7中文別名：異阿蘭內(nèi)酯
英文名：Isoalantolactone
CAS登錄號(hào)：470-17-7
分子式：C15H20O2
分子量：232.31
分子結(jié)構(gòu)：
外觀：無(wú)色針晶（）
規(guī)格：20mg/支
純度：≥ 98%
用途：用于含量測(cè)定/鑒定/藥理實(shí)驗(yàn)等。
提取來(lái)源：菊科植物土木香 Inula helenium L．根，藏木香I．Racemosa Hook．F．等。
溶解性：溶于乙醇、、和，不溶于水。
熔點(diǎn)：112-113℃
藥理藥效：1．驅(qū)蟲作用異土木香內(nèi)酯的藥理作用與山道年相似，以驅(qū)蟲作用為主。對(duì)豬和貓的蛔蟲異土木香內(nèi)酯和土木香內(nèi)酯的混合物對(duì)Australorbis glabratus有很強(qiáng)的性和滅殺作用。有強(qiáng)的抗原蟲作用，體外0．24～7．8ug/ml 對(duì)痢疾阿米巴和******************毛滴蟲有效。 2．抗菌作用體外抗皮膚真菌試驗(yàn)，對(duì)須癬毛菌、大小孢菌有明顯的抑制作用，作用強(qiáng)度與制菌霉素相當(dāng)，而遜于;低抑制濃度，對(duì)表皮癬菌為35ug./ml，對(duì)須發(fā)癬菌為25ug/ml，對(duì)尖發(fā)癬菌為15ug/ml；對(duì)豚鼠感染須發(fā)癬菌的體內(nèi)試驗(yàn)，1．5%異土木香內(nèi)酯油膏有很好的治療作用。還有很強(qiáng)的抗結(jié)核桿菌和其他微生物的作用。 3．其他作用異土木香內(nèi)酯與土木香內(nèi)酯的混合物，家兔注射0．1g/kg以上，明顯降低尿中硫鹽的量，而對(duì)氮排泄沒有影響。 [性]小鼠皮下注射小致死量為200mg/kg，性比山道年小。
貯存條件： 4℃冷藏、密封、避光
有效期： 2年
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