單細胞凝膠熒光檢測細胞凋亡
點擊次數(shù)：1075 更新時間：2016-08-08
以來人們一直認為不同種類的抗生素通過結(jié)合不同的作用靶點和各異的作用機制發(fā)揮殺菌作用。如 β-內(nèi)酰胺類抗生素在單細胞凝膠電泳分析(SCGE)是在單細胞水平進行DNA損傷和修復(fù)檢測的熒光檢測方法，具有簡單、快速、靈敏和原位等特點。因其細胞電泳形狀頗似彗星，又稱彗星試驗(comet Etssay)。
低熔點瓊脂糖凝膠將細胞包埋于載玻片上，細胞裂解液破壞細胞膜、核膜及其他生物膜，細胞內(nèi)RNA、蛋白質(zhì)及其他成分進入凝膠，繼而擴散至裂解液中，而核DNA仍原位附著于核骨架。如果細胞未受損傷，因核DNA分子量大，電泳中停留于原位，經(jīng)熒光染色后呈現(xiàn)圓形的熒光團，無拖尾現(xiàn)象。
若細胞受損，在堿性電泳液(pH>13)中，DNA雙鏈解螺旋且堿變性為單鏈，單鏈斷裂的小分子量DNA碎片進入凝膠，向陽極遷移，形成拖尾。細胞核DNA損傷愈嚴重，產(chǎn)生的斷鏈或堿變性片段愈多，其片段愈小；電場作用下遷移的DNA量多，遷移的距離長，熒光顯微鏡下可觀察到尾長增加和尾部熒光強度增強。一定條件下，DNA遷移距離(彗星尾長)和DNA古量(熒光強度)分布與DNA損傷程度呈線性相關(guān)。
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